質粒是細胞、基因和疫苗治療的重要工具。無論裸質粒還是包裝病毒載體，最終都是將質粒攜帶的目的基因導入息細胞，達到治療或預防疾病的目的。作為關鍵起始材料，高質量、高純度的超螺旋質粒是確保裸質粒、AAV和LV等基因載體安全有效的前提條件。

質粒的生產工藝步驟

? 質粒DNA骨架的構建

? 質粒DNA轉化至感受態細胞，篩選克隆及建立研究用菌種庫（RCB）

? 建立用于生產的主細胞庫及工作細胞庫

? 菌種復蘇及上游發酵生產（獲得足夠量的質粒DNA發酵液）

? 下游純化（去除產品及工藝相關雜質）

? 分裝獲得超螺旋質粒DNA（可用于病毒載體包裝，質粒DNA疫苗，細胞治療產品的轉導基因修飾系統等）

? 限制性內切酶酶切獲得線性化質粒（作為mRNA轉錄模板的原材料時需要該步驟）

耀海生物質粒DNA工藝開發服務團隊秉持質量源于設計（QbD）的理念，根據菌種特性與質粒超螺旋比例等關鍵質量標準建立穩健可放大的小試工藝。耀海質粒DNA工藝開發平臺涵蓋質粒構建、菌種構建與優勢菌篩選等構建與篩選服務。我們在工藝開發平臺下為客戶項目提供定制化小試級別發酵與純化工藝開發、制劑工藝開發服務，并同時為客戶項目提供分析方法開發與預驗證等原液/制劑全流程開發服務。耀海質粒DNA工藝開發平臺可滿足質粒DNA（原液與制劑）的工藝開發、工藝優化、工藝表征、工藝驗證和方法學開發需求。

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質粒發酵工藝平臺

耀海生物通過優化基礎培養基、補料培養基和發酵控制策略，建立了適用于質粒生產的大腸桿菌高密度發酵平臺工藝，培養周期30h內，質粒產量超過1g/L。

此外，耀海生物能夠針對不同的質粒和宿主菌，基于單因素或DoE方法提供工藝優化解決方案，定制化滿足質粒高產量、高質量需求。

耀海生物1 g/L質粒發酵工藝

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發酵工藝平臺介紹

耀海生物基于實驗設計（DoE）等方法學，能夠快速實現不同分子的定制化工藝開發和優化。我們專注于微生物重組蛋白、質粒DNA的工藝開發，針對大腸桿菌、酵母建立了高產量的平臺工藝，歡迎垂詢：19952981076

大腸桿菌包涵體產量：最高可達10g/L以上

大腸桿菌可溶性蛋白產量：最高可達5g/L以上

酵母胞外分泌蛋白含量：最高可達30g/L以上

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純化工藝平臺介紹

發酵收獲的菌體中除質粒DNA外，還包含大量的宿主蛋白(HCP)、宿主DNA(HCD)、宿主RNA、內毒素等工藝過程殘留。因此需針對質粒DNA的理化特性，設計與開發穩健可放大的純化工藝，獲得符合超螺旋質粒純度、雜質殘留要求的質粒DNA原液。適用于質粒DNA大規模生產的純化方案如下：離心或過濾收菌、堿裂解中和、澄清過濾、超濾換液、凝膠過濾去除RNA、嗜硫親和層析捕獲超螺旋質粒、陰離子柱去除內毒素等。

作為微生物表達體系CRDMO行業領跑者，耀海生物工藝開發團隊秉持質量源于設計(QbD)的理念。我們科學地考量質粒DNA的生理生化特性和關鍵質量屬性(CQA)，利用OFAT單因素或DoE快速優化過濾/裂解/超濾/層析等純化工藝參數。耀海生物已針對不同序列、不同長度的超螺旋質粒開發出滿足產品性能、可穩定放大的純化工藝。

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質粒工藝平臺服務優勢

?成熟的優勢菌篩選平臺

耀海平臺提供高通量、多宿主類型的大腸桿菌優勢菌篩選服務，單批可篩選100+候選菌株。

?高通量快速開發平臺

耀海平臺基于DoE和平行性實驗系統，高通量篩選發酵、純化、制劑工藝或處方。我們可滿足不同長度質粒DNA的表達量、純度、雜質殘留等開發目標，同時高度契合生產放大需求。

?分析方法開發平臺

根據不同特性的質粒DNA，我們針對性開發最適合的質量分析方法；同時配合工藝路線完成關鍵項質量檢測，涵蓋生化、理化等。

?合規性保障平臺

我們全面評估工藝過程與質量標準的合規性，如宿主來源、無動物源、抗生素類型、毒性或致敏性、純度、工藝過程殘留等，全流程符合法規申報需求。

?豐富的質粒開發經驗

耀海團隊具備多質粒項目開發經驗，針對線性化/超螺旋質粒開發穩健可放大的小試工藝。以期助力裸質粒、AAV、mRNA等細胞與基因治療產品的產業化進程。

?CDMO一站式服務平臺支撐

基于超十年的多品種生產及服務經驗，耀海生產團隊全流程提供生產經驗技術支持。工藝開發團隊貫徹產業化理念，能夠保證小試工藝高度契合生產需求。

? 技術轉移支持服務

工藝開發人員全流程支持小試工藝的轉移和放大。